iTRAQ 定量蛋白質分析的基本原理是在末端氨基和賴氨酸側將具有共價鍵的標記肽與 iTRAQ 試劑結合，通過高效液相色譜、初級質譜和二級質譜分離后，可以對樣品中的蛋白質進行表征和相對定量。

iTRAQ 分析適用于廣泛的樣品來源，幾乎所有收集的樣品都可以在蛋白質組學研究中使用該技術進行篩選。  無論是尋找功能性蛋白質、機理探索，還是篩選疾病生物標志物，iTRAQ 定量蛋白質組學都能以最便捷的方式將樣本轉化為研究結果。

理論上，iTRAQ 分析 需要每個樣品至少 300 μg 的蛋白質才能達到通常低于 100% 的成功實驗率。 因此，理想情況下，每次實驗準備的蛋白質量應足以進行兩次獨立實驗。 此外，收集的樣本可能并不總是滿足調查的需要。 因此，需要對選定的樣本以及如何充分處理它們給予更多的思考。

樣本種類繁多，包括組織、細胞、血液（血清或血漿）、腦脊液、尿液、骨骼、關節(jié)滑液等，不同樣本的采集方法也不同。  一般來說，需要滿足以下幾點：

1.代表性樣品 ：

樣品的代表性直接關系到檢測結果的科學意義； 因此，需要根據(jù)實驗目的仔細選擇抽樣方案。 實驗樣品和對照之間不應有污染。 如果可用，來自實驗組和對照組的樣品應在采樣時間、地點和處理條件方面保持一致。 否則，可能會影響實驗結果的整體可信度。 體液樣本需要通過逐步離心（或膜）去除干擾因素，包括但不限于細胞、細胞碎片和細菌。 不同樣本來源的蛋白質組是多種多樣的，甚至同一組織樣本的不同細胞也可以有顯著差異； 因此，量化兩個可能不相關的樣本是不可比的。 因此，在設計實驗以制備樣品時，考慮生物實驗中的單變量原理非常重要。

2.樣品準確性 ：

必須準確記錄各種代表性樣品的數(shù)據(jù)。 所有樣品必須按要求（低溫和即時）收集、制備、儲存和運輸，從而根據(jù)實驗設計獲得最終數(shù)據(jù)。

3.樣品時效性 ：

樣品質量是影響各類測試實驗中實驗結果的關鍵因素。 用于研究的樣品應立即收集、制備、儲存和運輸，以盡量減少實驗的樣品收集時間。 應特別注意易降解的樣本，例如胰腺； 以及易受微生物污染的樣品，例如尿液。

4.低溫處理 ：

樣品采集、標記、記錄后，立即用液氮速凍，-80℃保存。 不要太相信 -80°C 冰箱。 一般建議蛋白質組學研究的樣品保存時間不要超過一年，長期保存的樣品在使用前需要進行定性檢查以確定穩(wěn)定性。

輝駿生物建議您在取樣時同時保留和備份樣品，以防止部分降解和延遲重新取樣。  即使所有樣品都合格，備份樣品也可以用于實驗的不同方面（例如，定量驗證、蛋白質方面、生化方面等）。

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iTRAQ技術實驗 客戶文獻

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis. 2018，IF=14.299. 【研究內容】：骨關節(jié)炎和軟骨退變過程中，WNT/β-catenin被激活的機制尚未完全明確，本研究利用iTRAQ蛋白質組學技術，篩選了年輕（2月齡）和老齡（12月齡）小鼠的蛋白表達差異，并發(fā)現(xiàn)一種在老年軟骨中強烈上調的蛋白——酪氨酸激酶Fyn。為了探究Fyn促進骨關節(jié)炎發(fā)展的機制，客戶將免疫沉淀（IP）與蛋白質組學分析相結合，最終證明酪氨酸激酶Fyn可以通過激活β-catenin通路促進關節(jié)炎，為骨關節(jié)炎提供了一個新的治療靶點。 使用技術：iTRAQ蛋白質組學分析、iTraq實驗外包服務

2. Wu X.S. et al: Ubiquitin-specific protease 3 promotes cell migration and invasion by interacting with and deubiquitinating SUZ12 in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2019，IF= 7.068. 【研究內容】：泛素特異性蛋白酶3 (USP3) 的異常表達可能在腫瘤發(fā)展中起重要作用，然而其促進胃癌轉移的機制尚不明確。本研究利用itraq蛋白質組學技術鑒定了USP3過表達胃癌細胞與對照細胞之間差異表達的蛋白質，發(fā)現(xiàn)SUZ12對于USP3介導的胃癌活性是不可或缺的，USP3結合SUZ12，去泛素化SUZ12并使其穩(wěn)定。SUZ12敲除抑制USP3誘導的遷移、侵襲和EMT。結果表明USP3-SUZ12信號通路促進胃癌發(fā)展。   使用技術：itraq定量實驗、itraq定量蛋白組學檢測

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. 2019，IF=4.848. 【研究內容】：臨床上早期卵巢漿液性癌較難發(fā)現(xiàn)，而高級別漿液性癌(HGSC)和低級別漿液性癌(LGSC)的蛋白表達譜將為診斷和化療提供重要信息。研究者通過iTRAQ技術對13例HGSC和7例LGSC患者的標本進行了蛋白質組學分析，共鑒定出323個差異表達的蛋白質。IHC驗證后，選擇天冬酰胺合成酶(ASNS)和細絲蛋白A(FLNA)進行進一步的功能研究。體內和體外實驗結果表明，ASNS和FLNA是HGSC和LGSC的不同的生物標志物，可能對漿液性癌的預后和臨床治療有潛在的價值。 使用技術：itraq分析、itraq差異蛋白實驗

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