載體構(gòu)建好后瞬時轉(zhuǎn)染細胞進行RT-PCR檢測以驗證過表達效率。1.qPCR檢測有過表達倍數(shù)，質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)效率高，基因本底豐度不太高的話一般都可以過表達50倍以上；2.使用Divergent引物檢測過表達的PCR產(chǎn)物是大小正確的單一條帶，PCR產(chǎn)物進行sanger測序確定成環(huán)序列準確。滿足這兩個條件才可以認為載體實現(xiàn)了對circRNA的準確高效率過表達。