CircRNA的形成和線性RNA不同，因此對(duì)circRNA的過(guò)表達(dá)不能直接將序列連接到常規(guī)的真核表達(dá)載體（如pcDNA3.1）來(lái)進(jìn)行。

已明確的circRNA形成依賴于側(cè)翼序列中的反向互補(bǔ)序列（RCMs，如Alu元件）或與能調(diào)控circRNA生成的蛋白（如QKI）的結(jié)合位點(diǎn)，因此構(gòu)建載體時(shí)可以在circRNA序列上下游分別增加一段反向。