臨床診斷實驗室主要依賴于診斷感染的傳統(tǒng)表型方法,有時還依賴基因測序技術。技術的最新進展包括已進入日常微生物實踐的基質輔助激光解吸電離飛行時間 (MALDI-TOF) 質譜。MALDI-TOF 質譜法產生特定的質譜指紋,可以看作是微生物的獨特特征,有助于準確識別屬和種水平——具有用于菌株分型的巨大潛力。
幾種利用 MALDI-TOF質譜的方法現(xiàn)在正在微生物診斷實驗室中使用。一種方法將結果與市售質譜特征數(shù)據(jù)庫進行比較以識別樣本細菌,第二種方法使用蛋白質組數(shù)據(jù)庫從測序基因組中識別細菌中的生物標志物質量。 第二種生物信息學方法允許培養(yǎng)物生長和樣品處理條件的變化差異,而第一種方法在常規(guī)實驗室方法中特別有用,例如診斷,并且可以區(qū)分物種和亞種。
鑒于其準確性,該技術還可以直接應用于各種臨床樣本,最顯著的是血液、腦脊液、尿液、胸膜液和腹膜液。 由于當前 MALDI-TOF 協(xié)議的檢測限制,主要限制是樣本中存在的細菌數(shù)量。
為了繞過這個缺點,通常需要大量的血液和尿液樣本,以及使用培養(yǎng)物作為血液的額外富集。
使用上述兩種方法中的任何一種使用 MALDI-TOF 質譜法進行細菌鑒定的結果,診斷率和準確性在很大程度上取決于細菌分類和所用數(shù)據(jù)庫的質量。
使用 MALDI-TOF 技術鑒定細菌的主要優(yōu)勢之一是結果的快速可用性,通常在不到一個小時內就可以準備好。 此外,MALDI-TOF 質譜法能夠精確鑒定具有稀缺表型特征并且在 MALDI-TOF 時代之前需要進行 16S rRNA 基因測序的大量細菌。
MALDI-TOF 質譜法快速成功地用于真菌鑒定。 目前,該方法主要用于常規(guī)酵母鑒定,但需要進一步開發(fā)(尤其是在樣品制備協(xié)議和數(shù)據(jù)庫中)以將該方法用于其他真菌群(如皮膚癬菌和絲狀真菌)。
與細菌的情況類似,MALDI-TOF 質譜法對真菌屬和種的錯誤識別或未識別本質上是由于數(shù)據(jù)庫中的錯誤、缺失或不完整的參考光譜造成的。 缺點是目前包含在商業(yè)上可訪問的 MALDI-TOF 質譜系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫中的參考光譜不完整。
與傳統(tǒng)的微生物鑒定方法相比,MALDI-TOF 質譜法在大多數(shù)情況下都能顯著縮短工程師/技術人員的工作時間(準備樣品)和周轉時間(通過自動化分析程序獲得結果)。
MALDI-TOF MS 用于各種行業(yè),包括生物制藥、有機化學、代謝組學和基因組學,以及臨床和診斷和治療應用。 在有機化學應用中,MALDI-TOF 用于分析 核酸 、蛋白質和聚合物質量,以及識別寡核苷酸和小蛋白質的復雜混合物,為生化和化學研究人員提供有用的信息。 MALDI-TOF MS 在促進患者快速診斷和改善健康結果方面發(fā)揮著至關重要的作用。 這方面的一個主要例子是它用于臨床微生物學的患者樣本中微生物的常規(guī)分類。
總之,MALDI-TOF 質譜法是一種引人入勝的微生物鑒定新技術,它快速、高效、具有成本效益且易于使用。
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